液相色譜實(shí)戰(zhàn)寶典

第一章 緒論 1
第一節(jié)　色譜法的發(fā)展歷程 1
第二節(jié)　液相色譜法分類 2
一、吸附色譜法 3
二、分配色譜法 4
三、離子交換色譜法 7
四、離子色譜法 8
五、離子對色譜法 9
六、排阻色譜法 11
七、常見問題與解答 12
1．固定相或流動相的極性對溶質(zhì)的保留行為有何影響？ 12
2．化學(xué)鍵合相色譜是什么？有哪些突出的優(yōu)點(diǎn)？ 13
3．化學(xué)抑制型離子色譜和非抑制型離子色譜的區(qū)別是什么？ 13
4．離子交換色譜法、離子色譜法、離子對色譜法的區(qū)別是什么？ 14
5．各類液相色譜最適宜分離的物質(zhì)是什么？ 14
6．影響排阻色譜分離效果的因素有哪些？ 15
7．為什么利血平在排阻色譜校正曲線上相對應(yīng)的分子量要小很多？ 15
8．怎樣選擇一種合適的分析方法來分離已知目標(biāo)化合物？ 16
9．超臨界流體色譜法有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？ 16
10．為什么不用同一種物質(zhì)來調(diào)節(jié)pH值？ 17
11．無機(jī)鹽對樣品中無機(jī)物的保留行為有什么影響？ 18
12．怎樣選擇離子對試劑？ 18
13．反相離子對色譜與陰離子交換色譜有什么異同點(diǎn)？ 19
14．半制備液相色譜和制備液相色譜有什么區(qū)別？ 19
15．流動相與樣品溶劑不互溶是否可以進(jìn)樣？ 19
16．親和色譜有哪些用途？ 20
第三節(jié)　相關(guān)術(shù)語和概念 20
一、色譜流出曲線相關(guān)名詞 20
二、分配系數(shù) 22
三、容量因子 23
四、選擇因子 23
五、分離度 23
六、常見問題與解答 24
1．梯度洗脫的原理是什么？ 24
2．影響出峰時間的因素有哪些？ 24
3．怎樣將目標(biāo)化合物的保留時間提前？ 25
4．什么是容量因子？如何計(jì)算容量因子？ 25
5．怎樣通過改變流動相比例來延長保留時間？ 25
6．為什么保留時間總在變化？ 25
7．什么是液相色譜的基線？ 26
8．分離度（R）應(yīng)大于1.5是指什么？ 26
9．檢出限和定量限有什么區(qū)別？ 26
10．如何獲得檢出限？ 27
第四節(jié)　動力學(xué)過程 28
一、塔板理論 28
二、速率理論 29
三、常見問題與解答 32
1．液相色譜中影響峰擴(kuò)散的因素有哪些？ 32
2．怎樣提高液相色譜的分離度？ 33
3．怎樣提高液相色譜柱的柱效？ 34
4．色譜柱直徑對峰擴(kuò)散有哪些影響？ 34
第五節(jié)　應(yīng)用與前景 34
一、重點(diǎn)領(lǐng)域應(yīng)用情況 34
二、多維色譜技術(shù) 35
三、整體色譜柱技術(shù) 35
四、衍生化技術(shù) 36
五、聯(lián)用技術(shù) 36
六、常見問題與解答 38
1．多維液相色譜的優(yōu)勢有哪些？ 38
2．液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用在定性方面有哪些優(yōu)勢？ 39
3．液相色譜與光譜聯(lián)用技術(shù)在形態(tài)分析上有哪些優(yōu)勢? 39
4．液相色譜微型化的意義在哪里？ 40
5．液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)能完全替代液相色譜嗎？ 40

第二章 液相色譜儀結(jié)構(gòu)簡介及故障排除 41
第一節(jié)　儲液器和溶劑過濾器 41
一、儲液器 41
二、溶劑過濾器 42
三、常見問題與解答 43
1．為什么流動相使用前要過濾？ 43
2．液相系統(tǒng)中不銹鋼管路應(yīng)避免使用哪些溶劑？ 43
3．怎樣防止和處理溶劑過濾器堵塞？ 43
4．怎樣解決切換溶劑后系統(tǒng)壓力和基線不穩(wěn)的問題？ 44
5．如果溶劑跑空，氣泡會不會進(jìn)到柱子里？ 44
6．怎樣維護(hù)液相色譜溶劑過濾器？ 44
7．如何解決溶劑過濾器處氣泡排不干凈的問題？ 44
8．不銹鋼材質(zhì)與玻璃材質(zhì)的溶劑過濾器有什么區(qū)別？ 45
9．怎樣防止流動相中長藻？ 45
第二節(jié)　輸液泵 45
一、基本要求與分類 45
二、往復(fù)式恒流柱塞泵結(jié)構(gòu)與工作原理 47
三、常見的泵模塊構(gòu)造 47
四、維護(hù)、故障分析及排除方法 49
五、常見問題與解答 58
1．為什么流動相使用前要脫氣？ 58
2．如何判斷和排除單向閥故障？ 59
3．如何解決Waters 2695液相色譜儀出現(xiàn)的“solv delivery h/w fault”故障？ 60
4．為什么系統(tǒng)壓力會隨著測樣時間增加而變大？ 60
5．為什么儀器接上色譜柱與不接色譜柱壓力基本不變？ 61
6．什么原因?qū)е卤Ａ魰r間和峰面積的重復(fù)性不好？ 61
7．如何清洗單向閥？ 62
第三節(jié)　進(jìn)樣系統(tǒng) 62
一、基本構(gòu)造 62
二、進(jìn)樣方式分類 64
三、注意事項(xiàng) 68
四、故障分析及排除方法 69
五、常見問題與解答 70
1．如何更換Ultimate 3000液相色譜注射器？ 70
2．Ultimate 3000液相色譜進(jìn)樣針與定量環(huán)如何更換？ 70
3．為什么機(jī)械手臂抓住小瓶子進(jìn)完樣品后放不下來？ 71
4．如何使自動進(jìn)樣器彎曲的進(jìn)樣針恢復(fù)原狀？ 71
5．為什么手動進(jìn)樣只能選擇定量環(huán)的滿環(huán)進(jìn)樣或者半環(huán)進(jìn)樣？ 71
6．液相手動進(jìn)樣的六通閥與自動進(jìn)樣器的進(jìn)樣閥是否一樣？ 72
7．為什么自動進(jìn)樣器進(jìn)樣后樣品盤中時常會有液體？ 72
8．怎樣解決由進(jìn)樣器污染導(dǎo)致的鬼峰問題？ 72
9．安捷倫自動進(jìn)樣器如何更換進(jìn)樣針？ 73
10．安捷倫自動進(jìn)樣器如何更換進(jìn)樣針座？ 76
第四節(jié)　色譜柱 76
一、柱結(jié)構(gòu) 76
二、柱填料 79
三、填料填充技術(shù) 82
四、常見色譜柱及其應(yīng)用范圍 83
五、常見問題與解答 83
1．液相色譜柱的分離原理有哪些？ 83
2．如何啟用、保管和維護(hù)液相色譜柱？ 85
3．如何測試液相色譜柱的柱效？ 85
4．液相色譜柱保護(hù)柱有何作用？ 86
5．怎樣解決色譜柱導(dǎo)致的系統(tǒng)壓力過高的問題？ 87
6．實(shí)驗(yàn)結(jié)束后如何清洗液相色譜柱？ 87
7．正相色譜柱與反相色譜柱在填料上有什么區(qū)別？ 87
8．如何正確使用液相色譜柱？ 88
9．如何正確安裝液相色譜柱？ 89
10．液相色譜柱的金屬接頭與PEEK接頭有什么區(qū)別？ 90
11．不同品牌色譜柱管線接頭是否通用？ 90
12．如何計(jì)算色譜柱柱體積？ 91
13．液相色譜柱溫與組分分離度有什么關(guān)系？ 92
第五節(jié)　液相色譜檢測器 92
一、檢測器分類 92
二、性能指標(biāo) 94
三、常見檢測器 96
四、常見問題與解答 104
1．如何解決示差折光檢測器基線容易漂移的問題？ 104
2．怎樣沖洗已經(jīng)堵塞的檢測器？ 105
3．二極管陣列檢測器、可變波長檢測器和紫外可見吸收檢測器有什么區(qū)別？ 105
4．檢測器“光閘不能復(fù)位”故障如何排除？ 106
5．基線噪聲和檢測器噪聲的區(qū)別是什么？ 107
6．如何維護(hù)紫外檢測器流通池？ 108
7．液相色譜檢測器串聯(lián)使用時有哪些注意事項(xiàng)？ 108
8．如何解決基線噪聲大、基線漂移的問題？ 109
9．什么原因?qū)е伦鰳訒r總是在同一時間出現(xiàn)倒峰？ 109
10．蒸發(fā)光散射檢測器熱清洗如何操作？ 109
11．二極管陣列檢測器基線不穩(wěn)的原因有哪些？ 110
12．檢測器出殘留峰如何處理？ 110

第三章 色譜工作站 111
第一節(jié)　安裝與配置 111
一、安裝要求 112
二、安裝前設(shè)置 113
三、工作站軟件安裝 114
四、配置儀器 114
五、常見問題與解答 115
1．怎樣解決安捷倫LC 1260液相色譜工作站許可證錯誤無法登錄的問題？ 115
2．如何處理液相色譜工作站無法通信，停留在駐留模式的問題？ 115
3．如何解決液相色譜工作站顯示存在同名儀器的問題？ 116
4．怎樣解決工作站磁盤存滿導(dǎo)致內(nèi)存不足，儀器不能正常使用的問題？ 116
5．重新安裝工作站軟件有哪些注意事項(xiàng)？ 116
6．工作站可否安裝殺毒軟件？ 117
7．工作站數(shù)據(jù)多久備份一次為宜？ 118
8．怎樣更換老舊工作站安裝平臺？ 118
9．如何用一臺計(jì)算機(jī)控制多個工作站？ 118
10．如何遠(yuǎn)程控制工作站？ 118
第二節(jié)　常用參數(shù)的含義與設(shè)定 119
一、數(shù)據(jù)采集 119
二、數(shù)據(jù)處理 122
三、常見問題與解答 123
1．如何設(shè)置半峰寬、斜率、漂移、最小峰面積等積分參數(shù)？ 123
2．液相色譜工作站如何設(shè)置梯度洗脫程序？ 124
3．如何使用柱溫箱進(jìn)行控溫？ 124
4．如何正確設(shè)定參比波長？ 125
5．為何采集數(shù)據(jù)時的數(shù)據(jù)信號與后處理時的數(shù)據(jù)信號有差異？ 125
6．什么是閾值？怎樣設(shè)定閾值？ 125
7．怎樣查看和計(jì)算信噪比？ 125
8．信噪比計(jì)算中USP、JP、EP等分別代表什么？ 125
第三節(jié)　定性與定量 126
一、定性分析 126
二、定量分析 127
三、常見問題與解答 128
1．內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法各有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？ 128
2．面積歸一法定量需要進(jìn)樣量一致嗎？ 129
3．如何建立標(biāo)準(zhǔn)加入法的校正曲線？ 129
4．如何對目標(biāo)化合物進(jìn)行定性分析？ 129
5．如何選擇是用峰高定量還是峰面積定量？ 130
6．為什么在相同的條件下分析結(jié)果卻不一樣？ 130
7．各種曲線擬合方式有哪些區(qū)別？ 131
8．工作站中內(nèi)標(biāo)物需要怎樣設(shè)置？ 131
9．單點(diǎn)校正法的適用范圍有哪些？ 131
10．標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低點(diǎn)及線性范圍怎樣設(shè)置？ 132

第四章 液相色譜樣品前處理 133
第一節(jié)　液固萃取 134
一、直接萃取 134
二、超聲萃取 135
三、影響萃取的因素 136
四、常見問題與解答 138
1．超聲萃取有哪些優(yōu)點(diǎn)？ 138
2．農(nóng)藥檢測用的乙醚該如何除去過氧化物？ 139
3．常見的固體提取方式有哪些？ 139
4．振蕩和超聲哪個萃取效率更高？ 140
5．EPA3550 關(guān)于超聲萃取的方法中為什么要用無水硫酸鈉？ 141
6．超聲萃取具體怎樣操作？ 141
7．超聲萃取后怎樣進(jìn)行土壤顆粒物和萃取液的分離？ 142
8．索氏提取是否可以用其他提取方式替代？ 142
9．水蒸氣蒸餾和共水蒸餾有什么區(qū)別？ 142
10．水蒸氣蒸餾有哪些適用范圍？ 143