精編免疫學實驗指南

前言
第一章 免疫應答導論
單元1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗
基本方案 間接ELISA法檢測特異性抗體
備選方案1 直接競爭ELISA法檢測可溶性抗原
備選方案2 抗體夾心ELISA法檢測可溶性抗原
備選方案3 雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體
備選方案4 夾心ELISA法檢測同種型
備選方案5 直接細胞ELISA法檢測細胞表面抗原
備選方案6 間接細胞ELISA法檢測抗細胞表面抗原的特異性抗體
輔助方案 十字交叉連續(xù)稀釋分析法（criss-crossserial-dilutionanalysis）測定試劑最適濃度
單元1.2 多克隆抗血清的制備
基本方案 使用弗氏佐劑制備多克隆抗體的免疫接種法
備選方案 使用其他佐劑制備多克隆抗體的免疫接種法
輔助方案 從血液中制備血清
單元1.3 單克隆抗體的制備
基本方案1 單克隆抗體制備中的免疫接種
基本方案2 細胞融合與雜交瘤分選
輔助方案1 雜交瘤培養(yǎng)上清的篩選分析
輔助方案2 雜交瘤的建系
輔助方案3 有限稀釋克隆法
輔助方案4 克隆和擴增用培養(yǎng)基的制備
單元1.4 單克隆抗體培養(yǎng)上清與腹水的制備
基本方案1 單克隆細胞培養(yǎng)上清的制備
備選方案1 單克隆細胞培養(yǎng)上清的大規(guī)模制備
備選方案2 雜交瘤或細胞系細胞的大規(guī)模制備
基本方案2 含有單克隆抗體的腹水制備
單元1.5 免疫球蛋白G（IgG）的純化
基本方案1 硫酸銨沉淀和凝膠過濾層析
基本方案2 蛋白A交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析
備選方案1 蛋白G交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析
備選方案2 抗大鼠κ鏈單克隆抗體交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析
單元1.6 免疫球蛋白G（IgG）片段的水解
基本方案1 木瓜蛋白酶水解IgG成Fab片段摸索性試驗
基本方案2 木瓜蛋白酶水解IgG獲取Fab片段的大量制備
基本方案3 胃蛋白酶水解IgG成F（ab′）2片段的摸索性試驗
基本方案4 胃蛋白酶水解IgG獲取F（ab′）2片段的大量制備
備選方案 用預先活化的木瓜蛋白酶水解IgG制備F（ab）2
單元1.7 免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白D（IgD）的純化
基本方案1 用透析和凝膠過濾層析法純化IgM
備選方案1 硫酸銨沉淀法純化IgM
備選方案2 甘露聚糖結(jié)合蛋白親和純化IgM
備選方案3 IgM純化試劑盒
基本方案2 凝集素親和層析法純化小鼠IgD
單元1.8 抗體可變區(qū)（V區(qū)）的克隆、表達和修飾
基本方案1 通過使用冗余引物克隆和表達免疫球蛋白可變區(qū)
輔助方案 TA載體的制備
基本方案2 用ELISA法鑒定轉(zhuǎn)染細胞分泌的抗體分子
基本方案3 轉(zhuǎn)染細胞分泌抗體分子的鑒定
單元1.9 核酸免疫
基本方案1 小鼠注射接種DNA
基本方案2 小鼠基因槍接種DNA
輔助方案1 包裹DNA的金粉顆粒的制備
輔助方案2 制備包裹有DNA的金粉顆粒的樣品管
輔助方案3 基因槍接種中氦氣壓力和顆粒大小的最優(yōu)化
第二章 小鼠淋巴細胞功能的體內(nèi)體外分析
單元2.1 小鼠單個核細胞的分離
基本方案 從脾臟、胸腺和淋巴結(jié)制備細胞懸液
輔助方案1 去除脾臟細胞懸液中的紅細胞
輔助方案2 一步梯度法去除死細胞
單元2.2 磁珠法分離T細胞和B細胞
基本方案1 用AUTOMACS系統(tǒng)進行總T細胞、CD4+細胞或CD8+T細胞的自動分離
基本方案2 使用AUTOMACS系統(tǒng)進行B細胞的自動分選
基本方案3 使用AUTOMACS系統(tǒng)進行輔助細胞的自動分選
備選方案1 用磁性分選柱手工操作分離淋巴細胞
基本方案4 用AUTOMACS系統(tǒng)自動分選CD4+CD25+抑制性細胞
備選方案2 用磁性分選柱手工操作分離CD4+CD25+抑制性細胞
單元2.3 樹突細胞的分離
基本方案1 塑料黏附和EA玫瑰花結(jié)富集DC
輔助方案 膠原酶消化制備脾臟細胞懸液
基本方案2 用小鼠骨髓前體細胞培養(yǎng)樹突細胞（DC）
單元2.4 從小鼠脾臟分離小鼠天然殺傷細胞
基本方案
單元2.5 B細胞功能的檢測
基本方案1 抗原特異性的抗體產(chǎn)生
基本方案2 Jerne-NordinPFC測定法
基本方案3 Cunningham-SzenbergPFC測定法
備選方案1 改良Jerne-NordinPFC測定法用于型特異性反應
備選方案2 改良Jerne-NordinPFC測定法用于測定多克隆抗體反應
輔助方案1 制備瓊脂糖包被的玻片
輔助方案2 制備Cunningham-Szenberg小室
輔助方案3 三硝基苯半抗原（TNP）偶聯(lián)SRBC
輔助方案4 蛋白質(zhì)A偶聯(lián)SRBC
輔助方案5 制備TNP-卵白蛋白
輔助方案6 用Percoll梯度離心純化靜息B細胞
單元2.6 B淋巴細胞活化的早期事件
基本方案1 BCR誘導的B細胞內(nèi)鈣變化
基本方案2 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化的分析
基本方案3 細胞大小與B細胞活化分子表達的分析
單元2.7 B細胞功能的增殖檢測方法
基本方案 抗IgM與LPS刺激的B細胞增殖
備選方案1 用8-巰基喹啉（8-MG）刺激B細胞多克隆活化
備選方案2 用蛋白激酶C激活劑及鈣離子載體刺激B細胞多克隆活化
備選方案3 硫酸葡聚糖與poly（I∶C）刺激B細胞多克隆活化
備選方案4 細胞數(shù)量增加的定量
單元2.8 BrdU檢測T細胞和B細胞增殖
基本方案
單元2.9 采用細胞內(nèi)熒光染料CFSE檢測淋巴細胞的遷移和增殖
基本方案 淋巴細胞的CFSE標記
輔助方案 流式細胞儀分析CFSE標記的細胞
單元2.10 細胞毒性T淋巴細胞的誘導及檢測
基本方案1 從CTL前體中誘導細胞毒性
基本方案2 鉻釋放法分析CTL活性
輔助方案1 次要組織相容性抗原的小鼠體內(nèi)應答
輔助方案2 病毒抗原體內(nèi)免疫小鼠
輔助方案3 TNP修飾靶／刺激細胞
輔助方案4 病毒感染靶／刺激細胞
備選方案1 多克隆CTL活性的誘導
備選方案2 CTL再定向殺傷活性的檢測
單元2.11 T淋巴細胞增殖實驗
基本方案1 未致敏T淋巴細胞的活化
備選方案1 用抗體激活未致敏的T細胞
備選方案2 混合淋巴細胞增殖實驗
輔助方案1 從抗原呈遞細胞或刺激細胞懸液中剔除T淋巴細胞
輔助方案2 輔助／刺激細胞的滅活
基本方案2 致敏T細胞的活化
基本方案3 CD4+CD25+T細胞的活化和抑制功能的檢測
備選方案3 CD4+CD25+T細胞抑制功能的兩步法檢測：短期活化和擴增CD4+CD25+T細胞并分析其抑制功能
單元2.12 T細胞克隆的建立
基本方案1 產(chǎn)生和維持同種反應性Th和CTL克隆
基本方案2 用可溶性蛋白抗原誘導Th克隆
輔助方案1 制備刀豆蛋白A活化的上清（ConA上清）
輔助方案2 制備混合淋巴細胞培養(yǎng)上清（MLC上清）
輔助方案3 制備PMA激活的EL-4淋巴瘤細胞上清（EL-4上清）
輔助方案4 用顯微操作的方法克隆
單元2.13 制備小鼠T細胞雜交瘤
基本方案 細胞融合和T細胞雜交瘤的選擇
輔助方案1 篩選表達CD3-TCR原始雜交瘤
輔助方案2 篩選抗原特異性的雜交瘤
單元2.14 檢測凋亡和其他形式的細胞死亡
基本方案1 用活細胞或熒光染料定量細胞活性
基本方案2 DNA裂解片段的定量
備選方案 計數(shù)放射性標記的DNA定量細胞中DNA片段
輔助方案1 用125IUdR和51Cr放射性標記細胞核
輔助方案2 用3HTdR放射性標記細胞核
第三章 細胞活化的生物化學
單元3.1 淋巴細胞活化過程中肌醇磷脂周轉(zhuǎn)的分析
基本方案1 通過道威克斯（DOWEX）離子交換層析分析［3H］肌醇磷酸
備選方案 通過HPLC方法分析［3H］肌醇磷酸
基本方案2 通過薄層層析方法分析肌醇磷脂
單元3.2 抗磷酸化酪氨酸的印跡檢測
基本方案 抗磷酸化酪氨酸印跡檢測的準備及分析
備選方案 使用125I標記蛋白A進行檢測
單元3.3 免疫復合物方法檢測酪氨酸蛋白激酶
基本方案 酪氨酸蛋白激酶的免疫沉淀和自身磷酸化檢測
備選方案1 蛋白激酶對外源底物的磷酸化檢測
備選方案2 蛋白激酶對外源底物的磷酸化檢測
單元3.4 識別特異性酪氨酸磷酸化多肽抗體的制備
基本方案1 多克隆抗磷酸肽抗體的制備
基本方案2 制備抗磷酸肽的單克隆抗體
輔助方案1 肽的合成
輔助方案2 肽段偶聯(lián)到Affi-Gel10親和性基質(zhì)
輔助方案3 磷酸酪氨酸偶聯(lián)到Affi-Gel10親和基質(zhì)
單元3.5 T細胞中絲裂原活化的蛋白激酶（MAPK）活性分析
基本方案1 免疫復合物蛋白激酶測定
基本方案2 固相蛋白激酶法檢測JNK活性
基本方案3 SDS-PAGE后原位檢測JNK蛋白激酶活性［“膠內(nèi)”（IN-GEL）激酶測定］
基本方案4 利用磷酸化位點特異性抗體檢測MAPK的活化
輔助方案 制備GST-MAPK底物融合蛋白
單元3.6 脂筏的分離和應用
基本方案 通過蔗糖梯度浮選法制備去污劑抗性的膜并通過免疫印跡對蛋白質(zhì)進行分析
備選方案 用離心法制備去污劑抗性的膜
輔助方案1 脈沖追蹤方法分析去污劑抗性的膜蛋白
輔助方案2 通過放射性標記檢測去污劑抗性的膜蛋白的全部組分
輔助方案3 定量高效薄層色譜法（HP-TLC）進行DRM脂質(zhì)分析
輔助方案4 DEAE葡聚糖凝膠的制備
輔助方案5 C18反相色譜柱的制備
輔助方案6 用甲基-β-環(huán)式糊精去除膽固醇來破壞脂筏
輔助方案7 甲基-β-環(huán)式糊精（MBCD）處理去除膽固醇的動力學測定
輔助方案8 使用MBCD-膽固醇復合物進行細胞膽固醇去除
第四章 免疫熒光和細胞分離
單元4.1 細胞制備和試劑
基本方案1 單細胞表面抗原的免疫熒光標記
基本方案2 固定和滲透單細胞的細胞內(nèi)抗原的免疫熒光標記
輔助方案1 用異硫氰酸熒光黃（FITC）偶聯(lián)抗體
輔助方案2 長臂生物素偶聯(lián)抗體
備選方案1 未固定細胞胞內(nèi)抗原的免疫熒光檢測
備選方案2 用7-氨基放線菌素D（7-AAD）標記死細胞
單元4.2 流式細胞儀分析技術(shù)-BD公司出品的流式細胞儀
基本方案 FITC偶聯(lián)抗體的單色分析
輔助方案1 用校準微球和FACSComp軟件進行儀器檢測
輔助方案2 單色分析區(qū)分活細胞和死細胞
備選方案1 FITC和PE偶聯(lián)抗體的雙色分析
輔助方案3 雙色分析區(qū)分活細胞和死細胞
備選方案2 三色分析
備選方案3 四色分析
第五章 細胞因子及其受體
單元5.1 IL-2和IL-4的檢測
基本方案 采用CTLL-2細胞檢測小鼠IL-2和IL-4
備選方案1 采用CTLL-2細胞檢測人IL-2
備選方案2 采用CT.4S細胞檢測小鼠IL-4
備選方案3 采用CT.h4S細胞檢測人IL-4
輔助方案1 白細胞介素或T細胞生長因子（TCGF）單位的計算
輔助方案2 小鼠CTLL-2細胞的維持
輔助方案3 小鼠CT.4S細胞的維持
輔助方案4 小鼠CT.h4S細胞的維持
單元5.2 IL-10的檢測
基本方案
單元5.3 IL-12的檢測
基本方案 人和小鼠IL-12p75異二聚體的ELISA檢測方法
備選方案 人和小鼠IL-12p40亞基的ELISA檢測
單元5.4 IL-13的檢測
基本方案
單元5.5 IL-15的檢測
基本方案
單元5.6 IL-18的檢測
基本方案
單元5.7 γ干擾素的檢測
基本方案
單元5.8 流式細胞儀檢測細胞內(nèi)因子
基本方案 細胞內(nèi)因子的熒光標記
輔助方案1 PMA和ionomycin激活T細胞
輔助方案2 抗原活化T細胞
輔助方案3 固定和凍存PBMC
輔助方案4 PBMC的細胞表面標記
輔助方案5 用熒光標記的抗細胞因子抗體標記活化細胞內(nèi)的細胞因子
單元5.9 流式細胞儀檢測細胞因子受體
基本方案 用抗受體單克隆抗體檢測人和小鼠的細胞因子受體
備選方案1 用標記的細胞因子檢測細胞因子受體
備選方案2 多參數(shù)分析檢測淋巴細胞亞群細胞因子受體的表達
輔助方案1 單克隆抗體和細胞因子的滴定
輔助方案2 評價檢測試劑
單元5.10 用流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離分泌細胞因子的細胞
基本方案 細胞因子分泌實驗
備選方案1 PBMC分泌細胞因子的快速檢測
備選方案2 全血細胞分泌細胞因子的快速檢測
單元5.11 ELISPOT方法檢測分泌細胞因子的細胞
基本方案
單元5.12 α-、β-和γ-干擾素誘導的抗病毒活性的檢測
基本方案 小鼠干擾素誘導的抗病毒活性的檢測
輔助方案1 病毒培養(yǎng)體系的建立
輔助方案2 抗體中和實驗
備選方案 人干擾素誘導的抗病毒活性的檢測
單元5.13 趨化因子超家族的生物學反應
基本方案1 微型趨化實驗檢測趨化因子對粒細胞的趨化
備選方案1 微型趨化實驗檢測趨化因子對單核細胞的趨化
備選方案2 微型趨化實驗檢測趨化因子對淋巴細胞的趨化
輔助方案 細胞外基質(zhì)蛋白包被聚碳酸酯膜
基本方案2 趨化因子誘導的淋巴細胞內(nèi)游離鈣離子的檢測
第六章 天然免疫
單元6.1 小鼠巨噬細胞的分離
基本方案1 小鼠腹腔巨噬細胞的分離
基本方案2 小鼠骨髓巨噬細胞的分離和培養(yǎng)
單元6.2 小鼠巨噬細胞的表型檢測
基本方案 直標法檢測小鼠巨噬細胞的表型
備選方案 間標法檢測小鼠巨噬細胞的表型
單元6.3 人單核／巨噬細胞的表型檢測
基本方案
單元6.4 小鼠巨噬細胞的活化
基本方案 小鼠巨噬細胞的活化
輔助方案 炎性小鼠巨噬細胞的活化
單元6.5 巨噬細胞一氧化氮的檢測
基本方案
單元6.6 巨噬細胞吞噬功能和殺傷功能的檢測
基本方案1 巨噬細胞吞噬功能的檢測
輔助方案 利用FITC區(qū)分胞外黏附和胞內(nèi)吞噬的細菌
基本方案2 巨噬細胞殺傷功能的檢測
輔助方案 單核細胞增多性利斯特氏菌的制備
單元6.7 巨噬細胞抗腫瘤活性的檢測
基本方案 ［111In］釋放法檢測巨噬細胞對腫瘤細胞的殺傷作用
輔助方案 ［111In］標記腫瘤靶細胞
單元6.8 Fcγ受體介導的黏附作用和吞噬作用的檢測
基本方案 Fcγ受體介導的吞噬作用
輔助方案 FcγR介導的黏附作用
單元6.9 干擾素介導的抗腫瘤作用
基本方案
單元6.10 人NKT細胞的分離和擴增
基本方案1 NKT細胞的鑒定
基本方案2 免疫磁珠法分離NKT細胞及后續(xù)擴增
備選方案1 NKT細胞的流式分選及擴增
備選方案2 NKT細胞的克隆
輔助方案 NKT細胞的二次刺激和克隆
第七章 抗原加工處理和呈遞
單元7.1 抗原呈遞細胞的選擇和制備
基本方案 通過利斯特氏菌刺激制備腹腔巨噬細胞
備選方案1 連續(xù)注射利斯特氏菌和蛋白胨后制備腹腔巨噬細胞
輔助方案1 小鼠腹腔注射用利斯特氏菌的制備
備選方案2 ConA刺激的腹腔巨噬細胞的制備
備選方案3 骨髓來源的巨噬細胞的制備
輔助方案2 制備L929條件培養(yǎng)基
備選方案4 制備LPS刺激的B細胞
單元7.2 外源性抗原向T細胞的呈遞
基本方案 一種抗原加工處理和呈遞的檢測體系
備選方案1 用固定后的貼壁型抗原呈遞細胞檢測加工處理過的抗原肽
備選方案2 用固定后的非貼壁型抗原呈遞細胞檢測加工處理過的抗原肽
備選方案3 蛋白抗原致敏的細胞固定后檢測抗原加工和處理
第八章 人類免疫學研究
單元8.1 外周血和臍帶血中分離單個核細胞
基本方案 Ficoll-Hypaque梯度離心法分離單個核細胞
輔助方案 貼壁法去除單個核細胞中的單核細胞和巨噬細胞
單元8.2 T細胞亞群的分離純化
基本方案 間接淘洗法分離T細胞亞群
備選方案 抗體依賴補體介導的細胞毒作用分離T細胞亞群
輔助方案1 應用神經(jīng)氨酸酶處理的綿羊紅細胞玫瑰花環(huán)形成法分離T細胞
輔助方案2 應用AET處理的綿羊紅細胞玫瑰花環(huán)形成法分離T細胞
單元8.3 免疫磁珠法純化T細胞
基本方案
單元8.4 免疫磁珠法分離B細胞亞群
基本方案
單元8.5 單核細胞／巨噬細胞的分離
基本方案1 貼壁法分離單核細胞
基本方案2 根據(jù)大小沉降作用分離單核細胞
基本方案3 對流離心洗淘法分離單核細胞
單元8.6 人自然殺傷細胞的分離
基本方案 從PBMC分離人NK細胞
輔助方案 陰性選擇分離NK細胞的單克隆抗體的滴定
單元8.7 流式細胞儀檢測全血的人淋巴細胞
基本方案
單元8.8 淋巴細胞增殖實驗
基本方案 絲裂原誘導的外周血單個核細胞增殖實驗
備選方案1 單向混合淋巴細胞反應
備選方案2 抗原誘導的T細胞增殖實驗
輔助方案 3HTdR摻入和細胞收集
單元8.9 B細胞分泌抗體的檢測
基本方案
單元8.10 ELISA檢測抗體的含量
基本方案
單元8.11 ELISPOT檢測抗體的含量
基本方案 ELISPOT檢測分泌抗體的細胞
備選方案 用ELISPOT檢測儀檢測分泌抗體的細胞
單元8.12 抗體的體內(nèi)誘導和檢測
基本方案1 蛋白質(zhì)或多糖抗原體內(nèi)法誘導抗體的產(chǎn)生
基本方案2 ELISA法檢測體內(nèi)抗體的產(chǎn)生
輔助方案 肺炎球菌多糖與蛋白質(zhì)的偶聯(lián)
單元8.13 T細胞殺傷功能的檢測
基本方案1 抗CD3誘導的T細胞殺傷實驗
基本方案2 抗原誘導的特異性T細胞殺傷功能的檢測
單元8.14 NK／LAK細胞殺傷活性的檢測
基本方案 51Cr釋放法檢測NK／LAK細胞殺傷活性
輔助方案 腫瘤靶細胞的制備和標記
單元8.15 人T細胞的克隆和擴增
基本方案1 抗原特異性T細胞的誘導
基本方案2 Th1或Th2細胞的誘導
輔助方案1 T細胞的克隆
輔助方案2 克隆后T細胞的擴增
輔助方案3 T細胞克隆的凍存
單元8.16 制備EBV轉(zhuǎn)化的B細胞
基本方案
單元8.17 分離人腸黏膜單個核細胞
基本方案 分離人腸黏膜單個核細胞
輔助方案 用尼龍毛過濾器去除死細胞
單元8.18 人樹突細胞分離和培養(yǎng)
基本方案1 從外周單個核細胞中分離人樹突細胞
備選方案 免疫磁珠法分離樹突細胞
基本方案2 用單核細胞誘導人樹突細胞
單元8.19 分離和鑒定人自然殺傷細胞亞群
基本方案 從PBMC中分離人NK細胞
輔助方案 人NK細胞亞群的表型和功能分析
第九章 HIV的檢測與分析
單元9.1 外周血中HIV的分離和定量檢測
基本方案1 外周血中HIV的培養(yǎng)以及通過TCID定量來測定其滴度
基本方案2 感染同種異型T淋巴母細胞：原代分離PBMC中的HIV
輔助方案 評估HIV對CD4+靶細胞的致細胞病變效應：HIV介導的細胞死亡
單元9.2 感染CD4+原代細胞系及HIV的誘導
基本方案1 用HIV體外急性感染CD4+原代細胞及細胞系
基本方案2 建立HIV慢性感染細胞系
基本方案3 慢性感染細胞系中HIV的誘導
單元9.3 在單核細胞和巨噬細胞中培養(yǎng)HIV
基本方案 單核細胞來源的巨噬細胞培養(yǎng)和HIV感染
備選方案 用HIV懸液感染單核細胞來源的巨噬細胞
輔助方案1 擴增實驗室保存的親巨噬細胞的HIV-1病毒株
輔助方案2 擴增原代分離的親巨噬細胞的HIV-1病毒株
單元9.4 HIV蛋白的檢測
基本方案1 免疫印跡法檢測HIV蛋白
基本方案2 免疫熒光法檢測HIV蛋白
備選方案 流式細胞儀分析細胞內(nèi)HIV蛋白
基本方案3 HIV反轉(zhuǎn)錄酶活性檢測
單元9.5 用PCR檢測HIV的DNA及RNA
基本方案1 用PCR擴增及檢測HIV的DNA
基本方案2 用RT-PCR檢測HIV的RNA
單元9.6 體外評價各種制劑的抗HIV活性
基本方案1 保護靶T細胞免受HIV致細胞病變效應
基本方案2 表達CD4的HeLa細胞合胞體斑形成抑制試驗
基本方案3 ELISA檢測抗病毒劑對PBMC中HIVp24抗原產(chǎn)生的抑制作用
輔助方案 50%抑制濃度（IC50）的計算
單元9.7 基于痘苗病毒報道基因細胞融合檢測法定量功能性測定HIV包膜糖蛋白與受體的相互作用
基本方案 用質(zhì)粒表達包膜蛋白及受體進行融合檢測
備選方案1 用重組病毒對各種成分的融合試驗
備選方案2 活化的可溶性CD4融合檢測
輔助方案1 比色法測定融合依賴的報道基因活性
輔助方案2 原位染色測定報道基因活性
第十章 自身免疫性及炎癥性疾病動物模型
單元10.1 小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）
基本方案 應用PLP和MBP蛋白或多肽主動誘導EAE
備選方案 MBP或PLP特異性淋巴細胞被動轉(zhuǎn)移性誘導EAE
輔助方案1 PLP蛋白的純化
輔助方案2 MBP蛋白的純化
單元10.2 大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎
基本方案 佐劑性關(guān)節(jié)炎的誘導
輔助方案 分枝桿菌懸液的制備
單元10.3 膠原誘導性關(guān)節(jié)炎
基本方案 誘導小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎
輔助方案1 II型膠原（CII）的純化
輔助方案2 膠原（II）α1鏈的純化
輔助方案3 膠原（II）α1鏈內(nèi)溴化氰裂解片段的純化
輔助方案4 小鼠關(guān)節(jié)炎的評定
輔助方案5 檢測CIA小鼠T細胞對CII的增殖應答
單元10.4 小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎
基本方案1 實驗性自身免疫性甲狀腺炎的誘導和評定
輔助方案 小鼠甲狀腺球蛋白的制備
基本方案2 誘導EAT耐受
單元10.5 小鼠實驗性自身免疫性重癥肌無力
基本方案 EAMG的誘導和評定
輔助方案1 AChR的抽提與親和純化
輔助方案2 神經(jīng)毒素3-瓊脂糖的制備
輔助方案3 應用肌電圖評定EAMG
輔助方案4 通過檢測抗AChR抗體來評定EAMG
輔助方案5 小鼠肌肉AChR的制備
單元10.6 NOD小鼠：一種胰島素依賴性糖尿病模型
基本方案1 無特殊病原菌（SPF）級NOD小鼠的飼養(yǎng)
基本方案2 胰島素依賴性糖尿?。↖DDM）的診斷
備選方案 半定量胰島炎以作為進展為IDDM的亞臨床表現(xiàn)
輔助方案 胰腺中胰島細胞的分離
單元10.7 通過耗竭調(diào)節(jié)性T細胞誘導自身免疫性疾病
基本方案 通過胸腺切除術(shù)誘導年輕的成年大鼠糖尿病
備選方案 應用胸腺切除術(shù)誘導3周齡大鼠糖尿病
單元10.8 通過耗竭調(diào)節(jié)性T細胞誘導免疫缺陷小鼠炎癥性腸道疾病
基本方案 轉(zhuǎn)輸CD45RBhighCD4+T細胞誘導SCID小鼠IBD
輔助方案 監(jiān)測IBD進展
單元10.9 氣道高反應性動物模型
基本方案 應用OVA全身致敏及氣道激發(fā)誘導氣道超敏反應
輔助方案1 使用全身體積氣壓描記器非侵入性檢測氣道反應性
備選方案 OVA致敏氣道誘導氣道超敏反應
輔助方案2 體外檢測氣道對電場刺激的反應性
輔助方案3 T細胞功能和氣道炎癥的評定
單元10.10 誘導小鼠TNBS結(jié)腸炎
基本方案 小鼠TNBS結(jié)腸炎的誘導和評定
輔助方案1 分離小鼠腸系膜淋巴結(jié)細胞
輔助方案2 分離結(jié)腸炎小鼠的黏膜固有層細胞
單元10.11 系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型
基本方案1 ELISA檢測小鼠血清中抗染色質(zhì)抗體
基本方案2 單鏈和雙鏈DNA抗體的檢測
基本方案3 ELISA檢測類風濕因子
基本方案4 ELISA檢測同種異型特異性抗體時標準曲線的制作
備選方案 ELISPOT檢測抗染色質(zhì)抗體形成細胞
輔助方案1 低滲裂解雞紅細胞核制備雞染色質(zhì)
輔助方案2 dsDNA的制備
輔助方案3 基于PCR技術(shù)的faslpr突變體和fasLgld突變體的基因分型
第十一章 傳染性疾病動物模型
單元11.1 利什曼原蟲感染的小鼠模型
基本方案 皮膚利什曼原蟲病小鼠模型
輔助方案1 使用花生凝集素制備后發(fā)育期前鞭毛體
輔助方案2 從足墊組織中純化無鞭毛體
輔助方案3 前鞭毛體和無鞭毛體的冷藏和復蘇
輔助方案4 血瓊脂培養(yǎng)板的制備
單元11.2 弓形蟲感染動物模型
基本方案1 誘導小鼠急性弓形蟲T.gondii感染
基本方案2 小鼠慢性弓形蟲腦炎模型
基本方案3 感染T.gondii的重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠
基本方案4 溫度敏感的TS-4T.gondii菌株的感染模型
輔助方案1 對T.gondii感染進展和免疫應答的評估
輔助方案2 ME49T.gondii包囊種子庫的維持和保存
輔助方案3 用人類包皮成纖維細胞保存T.gondii速殖子
輔助方案4 小鼠體內(nèi)保存T.gondii速殖子
輔助方案5 T.gondii裂解物抗原的準備
單元11.3 巨細胞病毒感染小鼠模型的建立
基本方案 巨細胞病毒感染小鼠模型
輔助方案1 巨細胞病毒的準備
輔助方案2 唾液腺病毒的制備
輔助方案3 用空斑形成細胞試驗測定巨細胞病毒滴度
輔助方案4 原代小鼠胚胎成纖維細胞的制備
單元11.4 單核細胞增生性利斯特氏菌感染動物模型
基本方案 用單核細胞增生性利斯特氏菌株感染小鼠
輔助方案1 小鼠感染利斯特氏菌后的特異性和固有免疫反應評估
輔助方案2 利斯特氏菌特異性T細胞的制備
單元11.5 淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒感染動物模型
基本方案1 全身性感染LCMV小鼠模型
基本方案2 LCMV病毒持續(xù)感染小鼠模型
基本方案3 T細胞對LCMV免疫反應的測定
基本方案4 LCMV疫苗效果的體內(nèi)檢測
輔助方案1 LCMV病毒儲存液的制備
輔助方案2 噬菌斑試驗測定LCMV病毒滴度
輔助方案3 ELISA檢測LCMV抗體
單元11.6 流感病毒
基本方案1 流感病毒鼻腔內(nèi)感染麻醉的小鼠
備選方案 流感病毒鼻腔內(nèi)感染未麻醉小鼠
輔助方案1 流感病毒在雞胚中擴增
輔助方案2 雞胚尿囊液內(nèi)流感病毒滴度的測定
輔助方案3 MDCK細胞的長期培養(yǎng)
輔助方案4 培養(yǎng)組織流感病毒感染劑量（TCID50）的測定
輔助方案5 小鼠50%致死劑量（MLD50）和小鼠50%感染劑量（MID50）
輔助方案6 檢測流感病毒滴度的小鼠肺臟制備
輔助方案7 流感病毒儲存液中血凝單位的測定
輔助方案8 小鼠血清的血凝抑制試驗（HAI）
輔助方案9 流感病毒儲存液（原液）的系列稀釋
基本方案2 從脾臟前體細胞獲得流感病毒特異性的細胞毒T淋巴細胞（CTL）
基本方案3 收集含抗流感病毒CTL的肺臟細胞
輔助方案10 流感病毒中和試驗
第十二章 蛋白質(zhì)分離和分析
單元12.1 免疫親和層析
基本方案 可溶性或膜結(jié)合抗原的分離
備選方案1 抗原低pH洗脫
備選方案2 用辛烷基β-D-葡糖苷洗脫抗原
單元12.2 免疫沉淀
基本方案1 用非變性去垢劑裂解細胞制成的懸液進行免疫沉淀
備選方案1 用含非變性去垢劑溶液裂解的貼壁細胞進行免疫沉淀
備選方案2 用含變性去垢劑裂解液裂解的細胞進行免疫沉淀
備選方案3 用無去垢劑裂解液裂解的細胞進行免疫沉淀
備選方案4 用抗體-Sepharose進行免疫沉淀
輔助方案 抗體Sepharose的制備
備選方案5 用與ANTI-Ig結(jié)合的放射性標記的抗原進行免疫沉淀
基本方案2 再次捕獲免疫沉淀
單元12.3 單向蛋白質(zhì)凝膠電泳
基本方案
單元12.4 凝膠蛋白質(zhì)染色
基本方案1 考馬斯亮藍染色
基本方案2 銀染
基本方案3 SYPROOrange或SYPRORed熒光染色
基本方案4 SYPRORuby熒光染色
備選方案1 聚丙烯酰胺凝膠上磷蛋白的特異性熒光染色
輔助方案 磷酸酪氨酸殘基的特異性檢測
備選方案2 同一塊凝膠上的糖基化蛋白和非糖基化蛋白的差異性熒光染色
單元12.5 免疫印跡和免疫檢測
基本方案1 液體容器中的蛋白質(zhì)印跡
備選方案1 半干膠系統(tǒng)蛋白質(zhì)印跡
輔助方案1 轉(zhuǎn)移蛋白的可逆染色
基本方案2 采用二抗檢測的免疫探針法
備選方案2 親和素生物素化二抗的免疫探針法
基本方案3 生色底物顯色
備選方案3 生色底物顯色
輔助方案2 膜蛋白解離與再生
第十三章 肽
單元13.1 合成肽用以制備識別完整蛋白質(zhì)的抗體
基本方案1 通過計算機輔助方法選擇合適的抗原肽序列
備選方案1 通過人工篩查挑選合適的肽序列
基本方案2 設計一條肽鏈與載體蛋白相偶聯(lián)
備選方案2 設計合成一條多價抗原肽
基本方案3 使用雙功能團試劑將合成肽偶聯(lián)至載體蛋白
備選方案3 使用雙功能團試劑將合成肽偶聯(lián)至載體蛋白
輔助方案 計算肽連接到載體蛋白上的摩爾率
單元13.2 抗多肽血清的制備
基本方案1 在兔體內(nèi)制備抗多肽血清的免疫接種流程
基本方案2 用間接ELISA法檢測抗多肽抗體滴度
基本方案3 使用酸性、堿性或離液洗脫液的親和層析柱
輔助方案1 預先溶脹的NHS或CNBr活化樹脂的肽免疫親和層析柱的制備
輔助方案2 巰基化樹脂填充的肽親和層析柱的制備
單元13.3 采用合成肽組合庫鑒定B細胞和T細胞的表位
基本方案1 采用PS-SCL篩選抗體抑制劑
基本方案2 篩查PS-SCL鑒定CD4+或CD8+T細胞的配體
輔助方案 優(yōu)化用于篩查的抗原和抗體濃度
第十四章 分子生物學
單元14.1 293T細胞包裝和擴增反轉(zhuǎn)錄病毒
基本方案1 磷酸鈣／DNA沉淀瞬時轉(zhuǎn)染Phoenix反轉(zhuǎn)錄包裝細胞
備選方案1 水皰性口炎病毒G蛋白的假型反轉(zhuǎn)錄病毒
輔助方案1 水皰性口炎病毒G蛋白假型反轉(zhuǎn)錄病毒的濃縮和低溫儲存
輔助方案2 Phoenix細胞的培養(yǎng)
基本方案2 感染貼壁細胞
備選方案2 貼壁細胞快速（spin）感染（見基本方案2）
備選方案3 懸浮細胞的快速（spin）感染
單元14.2 免疫球蛋白融合蛋白的構(gòu)建
基本方案1 免疫球蛋白融合蛋白的構(gòu)建
基本方案2 免疫球蛋白融合基因分析
單元14.3 單鏈抗體的噬菌體展示技術(shù)
基本方案1 全套單鏈抗體噬菌體載體的構(gòu)建
基本方案2 scFv展示噬菌體在抗原包被板上的親和篩選
備選方案 鏈霉親和素包被的磁珠富集篩選生物素化抗原結(jié)合的scFv展示噬菌體
基本方案3 ELISA鑒定抗原結(jié)合的scFv展示噬菌體
輔助方案1 輔助噬菌體凍存液的配制
輔助方案2 指紋圖譜和PCR檢測克隆的正確性和多樣性
輔助方案3 蛋白質(zhì)的生物素化（NHS-SS-生物素）
輔助方案4 利用生物素蛋白連接酶使蛋白生物素化
單元14.4 整體培養(yǎng)中同型轉(zhuǎn)換重排的PCR檢測
基本方案1 通過轉(zhuǎn)換接頭的直接PCR
輔助方案 通過PCR和隨機引物標記法制備5′Sμ探針
基本方案2 消化環(huán)化PCR
單元14.5 PCR檢測細胞因子mRNA的表達
基本方案 定量IL-2mRNA表達水平
單元14.6 PCR檢測人T細胞受體基因的表達
基本方案 PCR檢測人T細胞受體基因的表達
備選方案 PCR定量檢測TCR可變序列轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物
輔助方案1 重排V-D-J區(qū)測序
輔助方案2 cDNA合成
單元14.7 PCR檢測小鼠T細胞受體表達
基本方案1 PCR分析小鼠TCR基因表達
基本方案2 PCR檢測小鼠TCR可變區(qū)的頻率
基本方案3 對小鼠可變區(qū)轉(zhuǎn)錄物進行PCR定量
基本方案4 序列分析V（D）J區(qū)的接頭多樣性
輔助方案 cDNA合成用于小鼠TCR基因表達的PCR分析
單元14.8 TCR庫的抗原譜／免疫掃描技術(shù)分析
基本方案1 人和小鼠TCR受體庫多樣性的免疫掃描技術(shù)分析
備選方案 利用［32P］dCTP進行免疫掃描分析
基本方案2 鏈接區(qū)引物進行高特異的分光光度分析
基本方案3 TCR基因擴增產(chǎn)物的快速高通量測序
單元14.9 多探針核糖核酸酶保護試驗同時測定mRNA表達
基本方案 多探針核糖核酸酶保護試驗
輔助方案1 構(gòu)建一個核糖探針模板
輔助方案2 凝膠電泳和結(jié)果的可視化
單元14.10 端粒長度和端粒酶活性的分析
基本方案1 Southern雜交檢測傳統(tǒng)凝膠電泳中末端端粒DNA限制性片段（TRF）的端粒長度
備選方案1 尼龍膜上的Southern雜交
輔助方案1 端粒或其他寡聚核苷酸末端標記
基本方案2 用脈沖電場凝膠電泳法測量端粒
基本方案3 熒光原位雜交
基本方案4 QFISH
輔助方案2 從分裂的淋巴細胞中制備分裂中期染色體
基本方案5 端粒酶活性的測定
備選方案2 非放射性的TRAP分析方法1：熒光染料（SYBRI）標記
備選方案3 非放射性的TRAP分析方法2：熒光染料（TAMRA-TS）標記
第十五章 免疫分子與受體工程學
單元15.1 用MHC-Ig二聚體檢測抗原特異性T細胞
基本方案 構(gòu)建MHCI-Ig二聚體
輔助方案1 測定MHC-Ig融合蛋白濃度
輔助方案2 J558L轉(zhuǎn)染細胞大規(guī)模培養(yǎng)及上清的濃縮
輔助方案3 用5-碘-4-羥基-3-硝基酚乙酰-瓊脂糖凝膠層析法純化MHC-Ig二聚體
輔助方案4 制備5-碘-4-羥基-3-硝基酚乙酰-瓊脂糖凝膠
輔助方案5 通過被動交換法為MHC-Ig嵌合蛋白負載多肽
輔助方案6 堿洗脫法負載多肽
輔助方案7 溫和酸性條件下負載多肽
輔助方案8 流式細胞分析抗原特異性T細胞
單元15.2 用MHC肽四聚體顯現(xiàn)抗原特異性T細胞
基本方案1 制備帶BirA底物標簽的MHCI類分子亞單位的包含體
基本方案2 MHCI類分子肽復合物的重新折疊
輔助方案1 用ELISA測定MHC
輔助方案2 用分子大小排阻層析法進行超濾和純化以濃縮折疊蛋白
基本方案3 用酶進行生物素化、純化及生物素化效率的分析
基本方案4 用鏈親和素使生物素化的單體形成多聚體
基本方案5 用標記的MHCI類分子四聚體通過流式細胞分析含特異性T細胞受體的細胞
附錄1 試劑與溶液
附錄2 實驗用小鼠、大鼠和倉鼠
附錄2A 常用小鼠和大鼠品系
附錄2B 飼養(yǎng)
附錄2C 處理和捕捉
基本方案1 小鼠的處理和捕捉
基本方案2 大鼠的處理和捕捉
基本方案3 倉鼠的處理和捕捉
備選方案 嚙齒類動物捕捉器
附錄2D 麻醉
基本方案1 小鼠、大鼠和倉鼠的注射麻醉
基本方案2 用甲氧氟烷吸入法麻醉小鼠、大鼠和倉鼠
附錄2E 腹腔注射
基本方案1 小鼠、大鼠和倉鼠的肌肉注射
基本方案2 小鼠、大鼠和倉鼠的皮內(nèi)注射
基本方案3 小鼠、大鼠和倉鼠的皮下注射
基本方案4 小鼠的靜脈注射
基本方案5 小鼠、大鼠和倉鼠的腹膜內(nèi)注射
基本方案6 小鼠足墊注射
基本方案7 小鼠胸腺內(nèi)注射
附錄2F 血液收集
基本方案1 小鼠和大鼠的眼眶或眼血管叢取血
基本方案2 小鼠和大鼠的尾靜脈微量采血管取血
備選方案 從小鼠和大鼠的尾靜脈以離心管取血
基本方案3 小鼠腋窩叢取血
附錄2G 安樂死
基本方案1 二氧化碳窒息
基本方案2 過量戊巴比妥注射
備選方案1 麻醉下放血
備選方案2 小鼠頸椎脫臼
附錄2H 淋巴器官和胸腺的摘除
基本方案1 小鼠淋巴器官的摘除
基本方案2 脾切除術(shù)
備選方案 脾半切除術(shù)
基本方案3 新生鼠胸腺摘除
基本方案4 成年鼠的胸腺摘除術(shù)
輔助方案 胸腺吸入套管的制備
附錄3 免疫學常用細胞實驗技術(shù)
附錄3A 細胞生長的檢測
基本方案1 血細胞計數(shù)板計數(shù)細胞
基本方案2 庫爾特粒度儀計數(shù)細胞
附錄3B 細胞凍存
基本方案1 細胞株或雜交瘤的凍存
基本方案2 細胞株或雜交瘤細胞的復蘇
附錄3C 臺盼藍拒染試驗檢測細胞活力
基本方案
附錄3D 瑞氏吉姆薩和非特異性酯酶染色
基本方案1 瑞氏吉姆薩染色通常用于淋巴細胞形態(tài)的研究
基本方案2 非特異性酯酶染色
附錄3E 3HTdR的摻入
基本方案
附錄3F 判斷并處理細胞培養(yǎng)中的支原體污染
基本方案1 檢測可能存在的支原體污染
基本方案2 用BM-cyclin處理污染的細胞
備選方案 用環(huán)丙沙星處理支原體污染的細胞
附錄3G 人外周血單個核細胞的分離
基本方案 靜脈穿刺采集外周血
備選方案 淋巴細胞去除法取血
附錄4 試劑和設備的供應商
參考文獻
索引